紫外分光光度計是一類很重要的分析儀器,因此,介紹了其基本原理和組成,論述了紫外分光光度計當前在國 內外的主要應用領域,并對紫外分光光度計的發(fā)展趨勢進行了分析。
1 紫外分光光度計的原理 紫外分光光度計儀器分析法廣泛應用于工農業(yè)各部門和科 學研究的各個領域中,它是利用物質分子吸收紫外可見光譜區(qū) 輻射的一種儀器分析方法。其基本原理是依據(jù)朗伯·比爾定律, 即光被透明介質吸收的比例與入射光的強度無關,光的吸收與 吸收層厚度、溶液濃度、光吸收率成正比,可用下式表示: A=k×b×c.(1) 式(1)中:A 為吸光度;k 為摩爾吸光系數(shù);b 為光程,即盛 放溶液的液槽的透光厚度;c 為溶液濃度。 當物質分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后,會發(fā) 生電子能級躍遷,從而產(chǎn)生吸收光譜。各種不同的分子、原子 和不同分子空間結構組成了自然界中形態(tài)各異的物質。因此, 物質吸收光能量的情況也不盡相同。依據(jù)物質*的吸收光譜 曲線上的某些特征波長處的吸光度,即可判定或測定該物質的 含量,從而對物質進行定量和定性的分析。
2 紫外分光光度計的組成 紫外分光光度計型號種類繁多,其基本結構由光學系統(tǒng)、電光 系統(tǒng)、光電系統(tǒng)、電子系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理和輸出打印系統(tǒng)等部分組成。
光學系統(tǒng)由轉向平面鏡、聚光鏡外光路系統(tǒng)、單色器三部 分組成。其中,單色器是紫外分光光度計雜散光的主要來源, 直接影響著整機的分析誤差;單色器和外光路系統(tǒng)有很多類型。
電光系統(tǒng)由氘燈、鎢燈和相應的電源組成,它直接影響著 整機運行的穩(wěn)定性。 光電系統(tǒng)由硅光電池、光電管、光電倍增管、晶體管陣列 組成,作用是將光信號轉換為電信號,反映了儀器整機的靈敏 度和適用范圍。 電子系統(tǒng)由 A/D 變換器、放大器等組成,作用是對電信號進 行相應的處理,以適于顯示和識別。放大器是產(chǎn)生儀器噪聲的主 要來源,對儀器的穩(wěn)定性、靈敏度和分析誤差有較大的影響。 數(shù)據(jù)處理、輸出打印系統(tǒng)負責顯示和輸出電信號,特別是 對軟件部分,決定了紫外分光光度計的可操作性和質量。
3 國內外的應用現(xiàn)狀 國內外的應用現(xiàn)狀分為以下 8方面:①對環(huán)境水樣進行快速 在線監(jiān)測。利用紫外可見光譜分析法可直接或間接地測定水中大 多數(shù)金屬離子、非金屬離子和有機污染物的含量,可實現(xiàn)對環(huán)境 水樣快速在線監(jiān)測和對多種水質參數(shù)的檢測。②由于大部分藥物 都能在紫外區(qū)產(chǎn)生吸收峰,因此,大吸收波長和摩爾吸收系數(shù) 可利用紫外分光光度計檢定物質的常用物理參數(shù)。將分析樣品和 標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在相同的測定條件下分 別測定紫外可見吸收光譜,可判定兩者是否為同一物質,準確性 高。目前,使用紫外分光光度計分析檢測多的藥品有維生素、 解熱藥、降血壓藥、抗生素、去痛藥、腹瀉藥、鎮(zhèn)咳藥、滴眼藥 和某些婦科藥等。③通過使用紫外分光光度計測定某些飲料或發(fā) 酵產(chǎn)品,從而使飲料產(chǎn)品的色差符合要求,或確定發(fā)酵的完成程 度、定性分析食品中的成分,以便排除食品中違禁使用的食品添 加劑或水產(chǎn)品中的有害物質,從而對食品或某些水產(chǎn)品進行質量 控制。④因氨基酸對紫外光的主要吸收波長為230 nm,因此,但在檢測分析時,要注意防止氨基酸溶劑帶來的干擾吸收 線問題。⑤由于DNA/蛋白質分子內的嘌呤堿、嘧啶堿、酪氨酸、 苯丙氨酸、色氨酸和肽鍵等,及其由它們參與組成的核昔、核苷 酸和核酸在一定波長范圍內對紫外光具有吸收作用,因此,利用 該特性,可以準確、可靠地測定乳制品中的蛋白質含量。⑥對農 藥及其殘留物中的有害物質含量進行分析。比如農作物中的某些 農藥原體、農藥的有毒代謝物、農藥的降解物和雜質等。⑦由于 石油的兩個特征吸收峰 225 nm 和254 nm 是測定煉油廠污水中 含油量時選用的吸收波長,因此,應用紫外分光光度計對石油油 品進行分析,可方便地測定石油的含量,從而控制石油工業(yè)產(chǎn)品 的質量。⑧紫外分光光度計分析法可方便地測定飼料的原料、添 加劑、混合飼料中的各種維生素、苯甲酸、乙酸酯、胡蘿卜素、 氨基酸、鉀、鐵、硒、碘、銅、錳、磺胺類藥物、灰黃 霉素、二甲硝咪唑和普魯卡因等的含量。
4 紫外分光光度計的發(fā)展趨勢 紫外分光光度計的發(fā)展趨勢分為以下 6 方面:①單色器、檢 測器、顯示或記錄系統(tǒng)、光源等分光光度計組件的不斷發(fā)展和完 善。特別是全息光柵技術的飛速發(fā)展,使成本不斷降低,正在迅 速取代機刻光柵。紫外分光光度計的顯示設備已普遍配置了液晶 顯示屏等顯示設備,比如美國珀金埃爾默公司生產(chǎn)的 555 型分光 光度計。②新型紫外分光光度計配備了種類豐富的附件產(chǎn)品,比 如積分球、試管架、蠕動泵進樣、微量樣品池架、特定樣品池架、 恒溫池架、光纖探測裝置和鏡面反射附件等。③計算機控制技術 正在不斷被應用到紫外分光光度計中,比如日本日立公司生產(chǎn)的 340型紫外分光光度計,大大改善了儀器的性能,提高了自動化程 度。④新型紫外分光光度計的性能在不斷提高。比如,我國北京 瑞利公司生產(chǎn)的 UV-2200 型紫外分光光度計,其雜散光可達到到 1/100 000,光譜帶寬由0.1 nm到5 nm分6檔可變,具有小0.1 nm 的光譜分辨率。⑤紫外分光光度計的功能逐步增多,實現(xiàn)了一機 多用。比如,島津公司的 UV-1240 紫外分光光度計既具有常規(guī)光 度檢測功能,又可以作為生物酶和水質分析的儀器。⑥紫外 分光光度計不斷向著小型化、便攜化、分析高速化的方向發(fā)展。 比如,美國海洋光學公司 2001年推出的 USB2000型微型光度計, 其質量只有 200 g,可與 PC機通過 USB接口連接,采用 2 048 位 元的 CCD檢測器,快積分時間只有3 ms。
5 結束語 隨著相關領域科學技術的不斷發(fā)展,紫外分光光度計儀器 分析技術正迅速向著快速、準確、自動、靈敏和適應強等方向 迅速發(fā)展。儀器科研工作者要熟練掌握各種常規(guī)分析儀器的性 能和操作方法,確保順利開展祥光科研工作。
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