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目前, 吸收光度分析已普遍運(yùn)用, 其中紫外分 光光度法是應(yīng)用廣泛的分析方法之一。紫外分光 光度法是通過可見- 紫外分光光度計(jì), 產(chǎn)生可見光, 紫外線照射某些不同物質(zhì), 不同濃度的物質(zhì)吸收光 譜不同, 可獲得不同吸收光譜的曲線, 同時(shí)它們的 吸收峰數(shù)值與濃度成正比關(guān)系, 遵循朗伯- 比爾定 律, 能夠鑒別中草藥和測定其有效成分的含量。 1 定性分析 1.1 鑒定物質(zhì) 朱華[1]、用分光光度計(jì)分別對水八角和羊開口進(jìn)行了 鑒定, 為水八角和羊開口的開發(fā)利用提供了參考依 據(jù)。方法如下: 稱取水八角粗粉 2 g, 加 20 ml 乙醇, 浸泡 24 h 后, 超聲提取 1 h, 過濾, 吸收濾液 1 ml, 加入 95%乙醇, 稀釋 50 倍, 以 95%乙醇做空白對 照, 在波長 400～ 800 nm波長范圍內(nèi)測定光譜圖。結(jié) 果在波長為 414.0 nm和 665.0 nm處有兩個(gè)大吸 收峰。取羊開口粗粉 5 g, 加乙醇 50 ml, 回流提取 1 h, 過濾, 取濾液 10 ml, 稀釋 100 倍搖勻, 以 95% 乙醇做空白對照, 在 200～ 800 nm 波長范圍內(nèi)測定 光譜, 結(jié)果在 273.0 nm和 219.0 nm處有兩個(gè)明顯吸收峰。郭建平等用紫外分光光度法對 15 種紫金 牛屬藥物進(jìn)行了鑒定, 并分類進(jìn)行比較, 找到了一 定的鑒別特征[2]。 1.2 鑒別物質(zhì) 中藥側(cè)柏常與同科植物柏樹葉發(fā)生混淆, 由于 兩種外形、顯微組織結(jié)構(gòu)酷似, 均含黃酮成分, 難以 用 《 中國藥典》規(guī)定的方法區(qū)別, 急需一種簡便、可 靠的理化鑒別方法。為此, 國內(nèi)學(xué)者何報(bào)作等人探 索用紫外光譜鑒別, 并觀察到不同季節(jié)對其無影 響, 重現(xiàn)性強(qiáng), 可供鑒別參考。方法如下: 采用無水 乙醇為空白, 比色池厚度為 1 cm, 波長范圍在 200～ 500 nm, 狹縫 2 nm, 繪制紫外吸收曲線。側(cè)柏葉的 吸收曲線為一平緩的降曲線, 可取兩個(gè)吸收峰 ( 268± 2 nm,411± 2 nm) , 但過于微弱, 有時(shí)甚至不 出現(xiàn); 柏樹葉有兩個(gè)強(qiáng)而明顯的吸收峰 ( 274± 1 nm, 330± 2 nm) ?？傊? 兩者的紫外光譜區(qū)別明顯、易識 別、操作簡便, 可作為鑒別依據(jù)。國內(nèi)學(xué)者周有華等 研究了羚羊角及其骨角塞粉在乙醇浸出物的紫外 光吸收光譜。實(shí)驗(yàn)表明它們的圖譜是有明顯差別 的。羚羊角分別在 203 nm和 403 nm波長處有大 吸收峰, 在 208～ 277 nm 處有 4 個(gè)小峰, 在 207 nm 處有一較寬較高的平坦峰。而骨塞僅在 210 nm 和 215 nm 處有一大吸收峰, 在 217 nm 處有一個(gè)小 峰。因?yàn)樽贤馕涨€有明顯的區(qū)別, 所以能夠?qū)?它們加以區(qū)別。2 定量分析 2.1 顯色比值法 王宇等對半夏藥材采用超聲提取, 依據(jù)酸性染 料比色法的原理, 在 pH=5.40 緩沖溶液中加入 0.1 μ g 溴麝香草酚藍(lán)顯色劑, 在 416 nm 處利用紫外分光 光度法測定藥材中總生物堿的含量。其在 1.40～ 7.00 μ g 范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系, 斜率 r=0.9996, 平均回收率為 102.02%, 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD=2.38%, 結(jié)果表明此方法簡便準(zhǔn)確[3]。張菊紅等 對照品蒺藜皂苷 FSA-1 和蒺藜總皂苷分別溶于硫 酸- 甲醇 ( 7∶ 3) 溶液中, 于 60 ℃作用 15 min 后, 用分 光光度法在 319 nm 處測定蒺藜總皂苷的含量, 濃 度與吸收值之間有良好的線性關(guān)系, 斜率 r=0.9996, 平均回收率為 98.22%, 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD=1.61%。 通過測定 6 批蒺藜全草中總皂苷的含量, 表明本法 簡單, 重現(xiàn)性好, 結(jié)果準(zhǔn)確[4]。 2.2 雙光束紫外分光光度計(jì)測定法 黃書銘等利用紫外分光光度計(jì)法建立一種快 速檢測和定量測定靈芝中三萜類化合物含量的方 法。以飽和 NaHCO3 溶液溶解靈芝三萜單體化合物 標(biāo)準(zhǔn)樣品后, 采用雙光束紫外分光光度計(jì)測定溶液 在 257 nm 大吸光度, 標(biāo)準(zhǔn)品在 0～ 200.0 μ g/ml 光 度與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系, 相關(guān)系數(shù)為斜率 r= 0.99988。利用紫外分光光度法提取三萜類化合物工 藝的中間階段, 即堿提的 NaHCO3 層進(jìn)行檢測, 根據(jù) 標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的三萜類化合物的含量。該 測定方法簡單快速、準(zhǔn)確度高、實(shí)驗(yàn)誤差小、重復(fù)性 好, 可以用于靈芝及其相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量評估[5]。 2.3 薄層- 紫外分光光度法 王京昆等應(yīng)用薄層色譜- 紫外分光光度法成功 地測定了鬼臼毒素的含量。其方法為定量稱取適量 用品, 用乙醇制成濃度為 7 mg/ml 層清液。在紫外 分光光度計(jì)下,200～ 400 nm 掃描, 結(jié)果大吸收波 長為 292 nm, 佳點(diǎn)樣量為 30 μ l。此法測定鬼臼毒 素的含量, 方法穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、回收率高, 不失為 一種可普及的使用方法[6]。專家徐汝明等用紫外分光光度儀測定了貝母中腺苷的 含量。以甲醇為參比, 測定在 260.0 nm 吸光度, 作 工作曲線, 腺苷在 31.4 μ g/ml 濃度時(shí), 其濃度與吸 光度呈良好的線性關(guān)系, 回歸方程為 C=18.04A0.087, 斜率 r=0.9999,平均回收率為 96.3%, 相對標(biāo) 準(zhǔn)偏差 RSD=1.35% ( n=5) 。此法是用薄層層析- 紫 外分光光度法建立藥用植物的腺苷含量的測定方法, 使之成為貝母內(nèi)在質(zhì)量評估的一個(gè)新指 標(biāo), 也為不同品種貝母的臨床應(yīng)用提供了一定的參 考。常軍民等用薄層分離新疆鼠尾草中 6,7- 去氫 羅列酮, 于 330 nm 處采用紫外分光光度法測定其 含量。當(dāng)含量為 0.37%時(shí), 在 10～ 15 μ g 的范圍內(nèi)具 有良好的線性關(guān)系, 斜率 r=0.9998, 平均回收率為 98.3%, 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD=2.58%[7]。國內(nèi)學(xué)者林輝 以乙醇提取藥材, 醋酸乙酯萃取, 聚酰胺柱層析分 離, 為于 360 nm 處用紫外分光光度法測定高良姜 的質(zhì)量指標(biāo)提供方法依據(jù)。 2.4 導(dǎo)數(shù)法 由于導(dǎo)數(shù)光譜具有可消除干擾、分辨率高的優(yōu) 點(diǎn), 所以不同的中草藥的導(dǎo)數(shù)光譜圖因所含化學(xué)成 分的不同而有差異, 故可作為中草藥有效成分鑒定 的手段之一。如一階導(dǎo)數(shù)光譜法鑒別 5 種貝母。5 種貝母均在 204 nm處有一尖峰, 湖北貝母、浙貝母 和東貝母均在 212 nm 有一尖峰, 湖北貝母和浙貝 母在 255～ 270 nm有一平滑弱吸收峰, 平貝母和川 貝母在 255～ 270 nm均是零。它們的一階導(dǎo)數(shù)光譜 不同, 易于鑒別[8]。 3 趨勢和展望
紫外分光光度法作為藥物分析的一種常用方 法, 由于其儀器簡便、快速, 結(jié)果準(zhǔn)確而得到普遍應(yīng) 用。將紫外分光光度法與其它分析方法聯(lián)用, 如可 見分光光度法, 薄層色譜法等將會成為藥物分析鑒 定中常用的手段。