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:擬建立紫外分光光度計法測定氨基寡糖素水劑中有效成分氨基寡糖素的分析方法。根據(jù)農(nóng)藥的性質(zhì)，氨基寡糖素可以水解 成氨基單糖( D －葡萄糖胺) ，D －葡萄糖胺在堿性條件下與乙酰丙酮形成生色原，生色原在酸性反應(yīng)液中與對二甲氨基苯反 應(yīng)形成紅色物質(zhì)，用紫外分光光度計在560nm 處測定其吸光度。氨基寡糖素在 0． 033 ～ 0． 528 mg/mL 范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈良 好的線性關(guān)系，該方法標(biāo)準(zhǔn)偏差0． 0001。該方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度，操作簡單易行、重現(xiàn)性好。

氨基寡糖素( Amino Oligosaccharins) ，也稱為農(nóng)業(yè)殼 寡糖，其中文別名為殼寡糖低聚 － D 氨基葡萄糖，是根據(jù)植 物的生長需要，采用*的生物技術(shù)生產(chǎn)而成，分為固態(tài)和 液態(tài)兩種類型。殼寡糖本身含有豐富的 C、 N，可被微生物分 解利用并作為植物生長的養(yǎng)份。 自20 世紀(jì)60 年代以來，殼寡糖作為植物免疫激活因子 越來越受到人們的重視。殼寡糖對植物影響主要是誘導(dǎo)抗 性，促使植物 POD、SOD、PAL 活性大大提高，又促進(jìn)植物合 成植保素，激發(fā)植物木質(zhì)素的合成和積累，提高作物抗病性， 同時又促進(jìn)植物生長。氨基寡糖素是從海洋生物外殼提取 而來的安全、無毒、無殘留的多糖類天然產(chǎn)物，經(jīng)酶解產(chǎn)生聚 合度為2 ～15 的寡聚糖，是一種新型的生物農(nóng)藥，對病毒、真 菌和細(xì)菌等等病原引起病害的防治均有一定的作用，并對病 原菌的生長有一定的抑制作用。國內(nèi)研究者發(fā)現(xiàn)氨基寡糖 對蘋果花葉病、西瓜病毒病、枯萎病、辣椒疫病等多種病害均 有較好的防治。另外，氨基寡糖素還具有提高作物產(chǎn)量，促 進(jìn)作物生長的作用。綜上所述，作為新型的生物農(nóng)藥，氨基 寡糖素的生產(chǎn)工藝簡單，應(yīng)用前景廣闊，但由于其組分并不 單一，產(chǎn)品質(zhì)量控制較為復(fù)雜，尚未發(fā)現(xiàn)用于農(nóng)藥制劑中質(zhì) 量分?jǐn)?shù)的測定方法，本篇文章擬參考氨基糖的特性反應(yīng)原理建立2%氨基寡糖素水劑中有效成分氨基寡糖素的檢測分析 方法。 1 實驗部分 1． 1 氨基寡糖素理化性質(zhì) 氨基寡糖素分子式為( C6H11O4N) n( n≥2) ，其相對分子 質(zhì)量約為 322 ～ 100000，熔點為 190 ～ 194℃，沸點為 102℃， 蒸氣壓( 20℃) 為 2330Pa，20℃時在水中的溶解度為332． 22 g/L，常溫下穩(wěn)定。

1． 2 檢測方法 氨基寡糖素用濃鹽酸水解成單糖( D － 葡萄糖胺) 后， D －葡萄糖胺在堿性條件下與乙酰丙酮形成生色原，生色原在 酸性反應(yīng)液中與對二甲氨基苯反應(yīng)形成紅色物質(zhì)，以氨 基寡糖素標(biāo)準(zhǔn)品為對照，用分光光度計測定并計算氨基寡糖素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。 1． 3 實驗試劑和溶液 氨基寡糖素標(biāo)準(zhǔn)品:已知準(zhǔn)確質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99． 0%; 無水乙醇( 分析純) ; 醋酸( 分析純) ; 氫氧化鈉溶液:400g/L; 顯色液; 乙酰丙酮( 分析純) ; E 液:取1 mL 乙酰丙酮于24 mL 碳酸鈉溶液中( 用前配 置) ; 對二甲氨基溶液( 分析純) ; P 液:稱取0． 8 g 對二甲氨基溶液于30 mL 乙醇 濃鹽酸( 1 +1) 溶液中( 用前配置) 。 1． 4 UV1901PC雙光束紫外可見分光光度計 ;電子天平。 1． 5 實驗步驟 1． 5． 1 氨基寡糖素標(biāo)樣溶液的水解及吸光度測定 稱取適量氨基寡糖素標(biāo)樣，置于含 30 mL 濃醋酸的圓底 燒瓶中，加熱回流水解 3 h，然后用氫氧化鈉溶液中和至 pH 值為7． 0，轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，加水定容至刻度，即為標(biāo) 準(zhǔn)氨基寡糖素水解定容液，取 1 mL 標(biāo)準(zhǔn)氨基寡糖素水解定 容液加入 100 mL 容量瓶中，加入 4 mL 水，再加入 1 mL E 液，于沸水浴中放置25min，至冰水浴中( 20℃ ～25℃) 1 h，作 三次重復(fù)，測定吸光度為 A1。 1． 5． 2 試樣溶液的水解與吸光度的測定 稱取含0． 05 g 氨基寡糖素試樣，置于含30 mL 濃醋酸的 水解裝置中，回餾水解 3 h，然后用氫氧化鈉中和 pH 值至 7． 0，轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，即為試樣水 解溶液。取1 mL 氨基寡糖素試樣水解定容液，加入 4 mL 水，再加入1 mL E 液，于沸水浴中放置25min，至冰浴中冷卻，然后加入 3 mL 無水乙醇，再加入 1 mL P 液，搖勻后 放置( 20 ～25℃) 1 h，作三次重復(fù)，測得樣品水解定容液的吸 光度為 A2。 同時按照標(biāo)樣溶液與試樣溶液的處理方法，作空白實 驗，在相同的條件下，未見有吸收，即此方法整個過程中未有 雜質(zhì)干擾。 1． 5． 3 試樣質(zhì)量分?jǐn)?shù)計算 試樣中氨基寡糖素的質(zhì)量分?jǐn)?shù) X1 按公式( 1) 計算:
X1 =
A2·m1·P A1·m2
( 1)
式中: A1 －氨基寡糖素標(biāo)樣的吸光度; A2 －氨基寡糖素試樣的吸光度; m1 －氨基寡糖素標(biāo)樣的質(zhì)量， g; m2 －氨基寡糖素試樣的質(zhì)量， g; P －標(biāo)樣中氨基寡糖素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)， %。 2 實驗結(jié)果與討論 2． 1 水解過程酸的選擇 此實驗過程中分別選用了濃鹽酸、濃醋酸和稀硫酸來對 氨基寡糖素進(jìn)行水解，但是通過實驗發(fā)現(xiàn)，相同的質(zhì)量的氨 基寡糖素標(biāo)樣，用濃醋酸的一組，其在 560 nm 的條件下，吸 光度大，即水解*的溶劑是濃醋酸，稀硫酸一組，吸光 度小，由于濃硫酸具有強(qiáng)烈的腐蝕性，即未考慮。所以 后選擇用濃醋酸作為水解試劑。 2． 2 調(diào)節(jié) pH 值過程堿液的選擇 此過程由于水解完畢，酸的量是極其過量的，因此，要調(diào) 至中性，所以選用了濃度比較高的強(qiáng)堿溶液氫氧化鈉溶液。 2． 3 線性關(guān)系實驗 分別移取方法1． 5． 1 中 0、0． 5、 1、 2、 4、6 mL 標(biāo)準(zhǔn)氨基寡 糖素水解定容液，進(jìn)行處理，測得吸光度值與濃度的關(guān)系。

3 結(jié)論 綜上所述，上述紫外分光光度計外標(biāo)法是可行、準(zhǔn)確、有 效且重現(xiàn)性好的氨基寡糖素測定方法，可以作為氨基寡糖素質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測的分析方法。